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大鼠肾组织IgA1、TfR、TGF-β、IL-6影响的研究

补肾健脾,解毒利咽法对IgA肾病模型大鼠肾组织IgA1、TfR、TGF-β、IL-6影响的研究

观察补肾健脾,解毒利咽法对IgA肾病模型大鼠肾组织中IgA1、TfR、TGF-β、IL-6的含量变化的影响,从而更加深入的研究与探讨,补肾健脾,解毒利咽法对于IgA肾病治疗的疗效作用与机理,为中医中药治疗IgA肾病奠定理论基础。方法:选取Wistar雄性大鼠80只,体重180±20g,购回后适应性的喂养1周,用分层随机的方法将大鼠分为空白组10只,造模组70只。空白组:从实验开始之日起,以4ml/kg蒸馏水灌胃隔日1次,共持续8周;皮下注射0.9%氯化纳溶液0.4ml/只,每周1次,持续9周;于第6周尾静脉注射0.9%氯化纳溶液0.2ml/只。第10周起,给予4ml/(kg·d)生理盐水灌喂,每日1次,持续12周末。造模组采取陆慧渝[1]等报道的方法,将牛血清白蛋白(BSA)结晶粉以蒸馏水配成100g/L浓度的稀释液体,从实验开始之日,以4ml/kg灌胃隔日1次,共持续8周;将四氯化碳(CCL4)与蓖麻油,以1:3的比例混合均匀,以0.4ml/只皮下注射,每周1次,共持续9周;将脂多糖(LPS)以0.9%NaCl配成0.25g/L的溶液,于第6周每只尾静脉注射0.2ml。第9周末随机选取12只大鼠,其中造模组10只及空白组2只进行验模。观察指标:(1)检测各组大鼠24小时尿红细胞计数及尿蛋白定量(UTP);(2)检测大鼠血清肾功能、肝功能的变化情况;(3)采用ELISA法和免疫组化法检测肾组织中IgA1、转铁蛋白(TfR)、转化生长因子-β(TGF-β)、白介素6(IL-6)含量变化及定位表达;(4)应用光镜观察各组大鼠肾组织病理形态学改变。结果:(1)实验过程中大鼠共死亡22只,其中验证模型处死12只大鼠,造模过程中死亡10只。(2)观察空白组大鼠在整个实验过程中一般状态良好,无明显异常状态表现;模型组大鼠给予四氯化碳皮下注射后表现为精神萎靡,腹泻,尿液颜色加深,大鼠的毛发杂乱不光泽,大鼠口鼻、皮肤浅表处有血性分泌物,大鼠的体重也有明显下降等表现。经过治疗23周后各治疗组大鼠一般状态好转,腹泻症状减少,尿液颜色也较之前澄清,大鼠的体重较之前有所增加。(3)空白组中大鼠没有出现血尿及蛋白尿症状,造模组中大鼠24小时RBC及24小时UTP有明显升高,各治疗组大鼠有所下降(P<0.05),组间比较治疗组与洛汀新对照组有明显差异(P<0.05)。(4)空白组:大鼠肾组织内,除血管内皮外,未见到IgA分子的沉积。造模组:大鼠肾组织内,可见明显的IgA分子与荧光物质结合形成的线状或点状的荧光亮点,这些荧光物质成线性排列。(5)IgA肾病模型大鼠肾组织内,可见明显的IgA1、TfR、TGF-β、IL-6分子的沉积与空白组比较明显升高。(6)各治疗组大鼠经治疗后IgA1、TfR、TGF-β、IL-6的水平明显下调(P<0.05),组间比较,补肾健脾,解毒利咽高、中低剂量组及洛汀新对照组比较有明显差异(P<0.05)。(7)各组大鼠之间比较,肾功能及肝功能在统计学意义上无差异(P>0.05)。结论:(1)实验过程中通过采用牛血清白蛋白灌胃及四氯化碳、脂多糖注射的方法,成功复制IgA肾病动物模型。(2)补肾健脾,解毒利咽组能有效的降低24小时尿红细胞计数及24小时尿蛋白排泄率;其中以中药组疗效优于洛汀新组。(3)Ig A肾病模型大鼠肾组织中Ig A1、TfR、TGF-β、IL-6的水平与空白组比较显升高,经给药治疗后IgA1、TfR、TGF-β、IL-6的水平有所下调,与病情呈负相关;说明IgA1、TfR、TGF-β、IL-6的异常表达参与了IgA肾病的发病,从而导致IgA肾病的发生。(4)各治疗组比较,补肾健脾,解毒利咽方药可能的机制可能与下调IgAN模型大鼠肾组织中IgA1、TfR、TGF-β、IL-6表达水平,来延缓IgAN的发生发展,减轻肾组织IgA沉积有关。

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