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肿瘤坏死因子检测试剂盒进行实验时有哪些条件选择

  肿瘤坏死因子检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
 
  1、固相载体的选择:人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
 
  2、包被抗体(或抗原)的选择:人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值*而蛋白量最少的浓度。人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
 
  肿瘤坏死因子检测试剂盒操作步骤:各试剂在使用前平衡至室温。
 
  1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外,余孔分别加标准溶液或待测样品100ul,注意不要有气泡,轻轻混匀,酶标板加上盖,37℃反应120分钟。
 
  2、弃去液体,甩干,不用洗涤。


肿瘤坏死因子检测试剂盒

  3、每孔加检测溶液A工作液 100ul,37℃,60分钟。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
 
  4、每孔加检测溶液B工作液 100ul,37℃,60分钟,洗板5次,甩干。
 
  5、依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色30分钟(此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显)。
 
  6、依序每孔加终止溶液50ul,终止反应。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。

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