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详细分析酶联免疫检测的几种方法及其原理

  酶联免疫检测是指利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点,将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白结合,并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。其原理是:抗原或抗体能物理性地吸附于固相表面,并且保持其免疫活性;抗原或抗体能与酶通过共价键形成酶结合物,同时保持各自的免疫活性或酶活性;酶结合物与相应的抗原或抗体结合后,能通过加入底物的颜色反应来确定免疫反应的发生,颜色反应的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。

  酶联免疫检测的几种方法及其原理:
 
  1、酶联免疫吸附试验:是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。
 
  2、夹心法:将已知的特异抗体包装在固相载体,加入待检标本,标本中的抗原即可与载体上的抗原结合,洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体,洗去未结合的酶标抗体,加底物显色,用酶免疫检测仪测量颜色的光密度,可定量测定抗原。
 
  3、间接法:常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体,加入待检标本,再加入酶标抗Ig的抗全,经加底物显色后,根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。
 
  4、BAS-ELISA:近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂,组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素分子可以结合4个生物素分子。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合,而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子,通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统,它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统,同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

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