检测试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
实验前准备:
1、使用前应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
2、准备各种实验仪器及材料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等。
3、浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液。
4、浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液。
5、用应用样品稀释液来稀释样品,按照1:100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中,充分混匀待用。
检测试剂盒实验原理:
1、抗原或抗体能吸附于固相载体表面,并坚持其免疫学活性;
2、抗原或抗体可通过共价键与酶衔接构成酶结合物,而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性;
3、酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可依据参加底物的色彩反响来断定是否有免疫反响的存在,并且色彩反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,ELISA检测试剂盒可依据已知浓度的抗原或抗体的色彩反响的深浅制作规范曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。
检测试剂盒注意事项:
1、建议所有标准品、样本都做双份检测。
2、底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
3、为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
4、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
5、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
6、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7、从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。