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解析猪ELISA试剂盒的实验原理

  猪ELISA试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。
 
  实验原理:
  猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入待测物质,再与HRP标记的待测物质抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

  猪ELISA试剂盒的计算:
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
 
  猪ELISA试剂盒的注意事项:
  1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
  3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zuì好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  4、请每次测定的同时做标准曲线,zuì好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第1孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请zuì后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、底物请避光保存。
  7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
  8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  9、本试剂不同批号组分不得混用。
  10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

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