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检测试剂盒在日常操作上分九个步骤

  检测试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
 
  检测试剂盒样本处理及要求:
  1、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
  3、不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
  检测试剂盒的操作步骤:
  1、标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
  2、加样:分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
  4、温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
  5、配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  7、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  8、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
  9、测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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