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关于细胞因子试剂盒的实验操作流程,以下有详细说明

  在细胞因子试剂盒中通常有3次加样步聚,即加标本,加酶联络物,加底物。加样时应将所加物加在细胞因子试剂盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留心不可溅起,不可发生气泡。加标本通常用微量加样器,按规矩的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴,防止发作交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。
 
  实验操作流程:
  1、加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干
  2、加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
  3、加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
  4、加底物液 → 37℃ 15分钟,加终止液
 
  细胞因子试剂盒的操作步骤:
  1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差;
  2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内;
  3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时;
  4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次;
  5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟;
  6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次;
  7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照;
  8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果;
  9、在450nm波长处测定各孔的OD值。

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