13052188602
新闻资讯
首页 > 新闻资讯 > 你知道肝纤试剂盒的操作步骤是如何进行的吗?

你知道肝纤试剂盒的操作步骤是如何进行的吗?

  肝纤试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人HGS抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人HGS与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人HGS抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人HGS抗体与结合在包被抗体上的人HGS结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HGS)试剂盒浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人HGS的浓度。
 
  肝纤试剂盒的操作步骤:
 
  实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
 
  1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
 
  为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
 
  2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
 
  3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
 
  4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
 
  5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
 
  6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
 
  7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
 
  8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。

文章资讯

  • 新闻资讯
  • 技术文章
    • 联系我们

      邮箱:shlmai@163.com
    • 地址:上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
    • 座机:86-021-67680335
    • 联系人:周经理

    Copyright © 2018 All Rights Reserved 网站地图 技术支持:环保在线  备案号:  管理登陆

    分享到:
    在线客服