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对TNF-α试剂盒正确的操作步骤进行详细说明
TNF-α试剂盒标曲清晰，市场反响很好，灵敏度高，测定标本十分广泛。我司具有稳定的实验体系,的科研队伍,准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴,凡购买我司的试剂盒产品都可提供全程免费技术指导。
TNF-α试剂盒实验目的要求了解试验原理，试验方法及结果分析。我司产品涉及行业广泛，有免疫学，分子学，蛋白质表达纯化及检测，细胞学相关实验等。可随时提供产品zui新价格查询、供应系列产品、批发等业务。
TNF-α试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。用特异性的大鼠TNF-α单克隆抗体包被在96孔板上，制作固相抗体。加入标准品和检测样品，随后加入大鼠TNF-a特异性的山羊来源，生物素标记的多克隆检测抗体。经过孵育，加入抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物，利用HRP催化底物TMB转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠肿瘤坏死因子α呈正相关。
TNF-α试剂盒操作步骤：
1、标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
2、加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
8、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应。
11、TNF-α试剂盒的测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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