信裕试剂盒实验步骤:
1、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在上海恒远生物白介素ELISA试剂盒酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
4、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
5、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
6、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
7、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
8、计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
信裕试剂盒实验清洁方面应留意什么:
1、洗板:
a.保证洗液注满各孔,洗板针疏通,洗完板后在吸水纸上轻轻拍干。
b.合理安排,或多用几台洗板机。
2、读板:应保证酶标板清洁,在整个操作过程中保证酶标板不触摸次氯酸;尽可能完结ELISA检测标准自动化,有用前进检测质量。
3、加样:
a.标本为血清:将血液先天然寄存1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:有必要运用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后有必要当即倒置采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
b.加样后及时放入孵箱。
c.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
d.如果选用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
e.标本较多时,请分批操作。