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有关猪ELISA试剂盒的操作步骤,这里有详细介绍

  猪ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
 
  实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
 
  猪ELISA试剂盒标本要求:
  1、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  2、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 

  操作步骤:
  1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
  2、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  8、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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