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细说多克隆抗体的制备流程和结果判定

  多克隆抗体一般通过免疫接种合适的哺乳类动物而产生,例如小鼠、兔子或者山羊。通常更倾向于采用大型哺乳类动物,因为可以采集更多的血清。首先将抗原注射到哺乳动物体内,诱导B-淋巴细胞产生抗原特异性的免疫球蛋白 (IgG)。该哺乳动物血清经过纯化可得到多克隆IgG。
 
  多克隆抗体制备流程:
  1、抗原制备:
  a、蛋白抗原制备:拥有密码子优化平台及可溶性蛋白表达平台,可得到>90%纯度的可溶性抗原;
  b、多肽抗原制备:针对特定的蛋白结合位点序列设计合成多肽,并与KLH缀合用于免疫。
  2、免疫宿主:每只宿主进行4次免疫,包括初次免疫和3次加强免疫。
  3、抗体纯化:提供两种抗体纯化方法,即抗原亲和纯化和Protein A/G纯化。
 
  结果判定:
  1、抗Ig的效价测定:琼脂扩散效价达1﹕16或1﹕32者为合格。
  2、纯度鉴定:采用琼扩法。中间孔加抗Ig血清,外周孔加Ig和标准品Ig。在抗Ig与I抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构,叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,因而使机体产生好几种不同的抗体,最终产生出抗体是浆细胞。只针对一个抗原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系,纯系的英文为Clone,音译就是克隆。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就象岛弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。

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