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原代细胞在实际中应该如何运输和保存?

  原代细胞的原理在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
 
  细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
 
  原代细胞的特性:
  1、组织来源于实验动物的正常主动脉组织。
  2、细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色为阳性。
  3、经鉴定细胞纯度高于90%。
  4、不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
  5、细胞生长方式:上皮样,多角形细胞,贴壁培养。
 
  产品的运输和保存:
  视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
  1、1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
  2、T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

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