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人白介素6试剂盒

简要描述:

人白介素6试剂盒?规格: 96T检测范围: 4.69pg/ml→300pg/ml。敏感性: <0.3pg/ml特异性: 系统和其它细胞因子无交叉反应。保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液

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人白介素6试剂盒
规格: 96T
检测范围: 4.69pg/ml→300pg/ml。
敏感性: <0.3pg/ml
特异性: 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
人白介素6试剂盒工作原理
Interleukin-6 ,IL-6,白介素-6。IL-6 是一种多功能细胞因子,在体内免疫反应调节、血细胞的
增生、防御机制和急性期反应中起中心作用。既可由淋巴细胞产生,也能由非淋巴细胞合成,如
单核/巨噬细胞,纤维母细胞,肝细胞,角化细胞,星形细胞,血管内皮细胞和各种肿瘤细胞。IL-6
的合成受多种细胞因子、核分裂因子和抗原的刺激而增加。IL-6 是一种糖蛋白,包含 N-和 O-连
碳水化合物,分子量 21KD-28KD。其糖蛋白成份并非功能所必须。人的 IL-6 的前体有 212 个氨
基酸,切除 N-端 28 个氨基酸后,形成 184 个氨基酸的成熟蛋白质。本试剂盒所用的标准品为重
组人 IL-6,有 184 个氨基酸,分子量 20.3KDa。
所提供的 IL-6 ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。预先包被的抗体为单克隆抗体。检测相抗体为单克隆抗
体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS 或 TBS 洗
涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过 PBS 或 TBS 的彻底洗涤后用底物 TMB 显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样
品中的 IL-6 呈正相关。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将 1X 洗涤缓冲液至少 300ul 注入孔内,浸泡 1-2 分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

细胞培养上清——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血清——用干净试管收集血液,室温凝固 30 分钟,离心 1500×g 15 分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血浆—在冰块上收集肝素或 EDTA 抗凝血,抽血后 30 分钟内离心 1500×g 15 分钟。血浆在 2-8℃进一步离心 10000×g 10 分钟,以完全清除血小板。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞裂解液——对于贴壁细胞,去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常 10 秒后,细胞就会被裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散,用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后,10000—14000g 离心 3-5 分钟,取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则

用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA 试剂盒的*检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同,分别采取不同的

稀释方案

高——指待测因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀释。297ul 样品稀释液加 3ul 样品。

中——指待测因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀释。225ul 样品稀释液加 25ul 样品。

低——指待测因子在 31.2-2000pg/ml。按 1:2 稀释。100ul 样品稀释液加 100ul 样品。

特低——指待测因子≤31.2pg/ml。样品一般不做稀释,或按 1:2 稀释。

操作程序总结:

1. 加样品和标准品,37℃反应 90 分钟。不洗。

2. 加生物素标记抗体,37℃反应 60 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。

3. 加 ABC,37℃反应 30 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。

4. TMB37℃反应 15-20 分钟。

5. 加入 TMB 终止液,读数。

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