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Human uPAR ELISA Kit

简要描述:

Human uPAR ELISA Kit
规格: 96T
检测范围: 62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性: <4pg/ml
特异性: 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人尿液、血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清。

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Human uPAR ELISA Kit
规格: 96T
检测范围: 62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性: <4pg/ml
特异性: 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人尿液、血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清。
Human uPAR ELISA Kit工作原理
u-Plasminogen Activator/Urokinase, uPA, 尿激酶型纤溶酶原激活因子, 是一个有严格底物限制的
丝氨酸酶,切除纤溶酶原中的 Cys-Pro-Gly-Arg560-Val1561-Val-Gly-Cys 序列,形成纤溶酶。uPAR 是
细胞膜表面受体, 对 uPA 有高亲和力,从而促进细胞外纤溶酶原的激活。uPA,uPAR,PAI-1 构成了
调节细胞吸附、移动、增生和分化的三重体系。人的 uPAR 初始合成时有 335 个氨基酸(N 端 22
个氨基酸的引导片段),羧基端进一步切除 30 个氨基酸后,通过糖化磷脂酰肌醇(glycosyl
phosphatidylinositol, GPI)连接到细胞膜。所以成熟 uPAR 有 283 个氨基酸。UPA/uPAR 系统除了
活化纤溶酶原外,还有一些其它功能,如 uPAR 还参与细胞的吸附。本试剂盒所用标准品为人重
组 uPAR,有 287 个氨基酸,分子量分别为 31KDa。
所提供的人 uPAR ELISA Kit 是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA)。预先包被的抗体和检测相抗体都是多克隆抗体。检测相
抗体经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS 或 TBS 洗
涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过 PBS 或 TBS 的彻底洗涤后用底物 TMB 显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样
品中的人 uPAR 呈正相关。

内容

规格

数量

预包被抗uPAR 抗体的 96 孔板

96T

1

冻干标准品

10ng/管

2

生物素标记

130ul

1

亲和素-过氧化物酶复合物

130ul

1

样品稀释液

30ml

1

抗体稀释液

12ml

1

ABC 稀释液

12ml

1

TMB 显色液

10ml

1

TMB 终止液

10ml

1

洗涤缓冲液(25X)

20ml

1

封板膜

 

2

说明书

 

1

需要而未提供的试剂和器材

1. 标准规格酶标仪。

2. 自动洗板机。

3. 恒温箱

4. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,用多通道移液器。

5. 干净的试管和 Eppendof 管。

6. 用去离子水将 25X 洗涤缓冲液稀释 25 倍,成 1X 洗涤缓冲液。

注意事项

1. 使用前 TMB 显色液应为无色透明溶液,若发现颜色异常,请及时与厂家。

2. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

3 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。

4. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。

5. 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。

6. 本公司提供的 96 孔酶标板是单条可拆型酶标板,用户可按需求使用;剩余的酶标板请

 按保存条件贮存。

7. 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将 1X 洗涤缓冲液至少 300ul 注入孔内,浸泡 1-2 分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

样品的准备和保存

样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

细胞培养上清——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血清——用干净试管收集血液,室温凝固 30 分钟,离心 1500×g 15 分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

血浆—在冰块上收集肝素或 EDTA 抗凝血,抽血后 30 分钟内离心 1500×g 15 分钟。血浆在 2-8℃进一步离心 10000×g 10 分钟,以完全清除血小板。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞裂解液——对于贴壁细胞,去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常 10 秒后,细胞就会被裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散,用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后,10000—14000g 离心 3-5 分钟,取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

样品稀释的一般原则

用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA 试剂盒的完美检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同,分别采取不同的

稀释方案:

高——指待测因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀释。297ul 样品稀释液加 3ul 样品。

中——指待测因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀释。225ul 样品稀释液加 25ul 样品。

低——指待测因子在 31.2-2000pg/ml。按 1:2 稀释。100ul 样品稀释液加 100ul 样品。

特低——指待测因子≤31.2pg/ml。样品一般不做稀释,或按 1:2 稀释。

操作程序总结:

1. 加样品和标准品,37℃反应 90 分钟。不洗。

2. 加生物素标记抗体,37℃反应 60 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 3 次。

3. 加 ABC,37℃反应 30 分钟。1X 洗涤缓冲液洗涤 5 次。

4. TMB37℃反应 15-20 分钟。

5. 加入 TMB 终止液,读数。

大鼠 半胱氨酸蛋白酶3 Casp-3 Caspase 3

大鼠 半胱氨酸蛋白酶8 Casp-8 Caspase 8

大鼠 半胱氨酸蛋白酶9 Casp-9 Caspase 9

大鼠 半胱氨酸蛋白酶抑制剂;胱抑素C Cys-C Cystatin C

大鼠 半胱氨酰白三烯 CysLTs Cysteinyl leukotrienes

大鼠 半胱氨酰白三烯受体2 CYSLTR2 Cysteinyl Leukotriene Receptor 2

大鼠 半乳糖凝集素3 Galectin-3 Galectin-3

大鼠 胞浆型磷脂酶A2 cPLA2 cytosolic phospholipase A2

大鼠 苯胺羟化酶 ANH Aniline hydroxylase

大鼠 表皮生长因子 EGF Epidermal growth factor

大鼠 丙氨酸氨基转移酶 ALT Alanine Aminotransferase

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