RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
英文名称：Mouse Monocyte - macrophage Leukemia Cells
规格：1*10 ⁶  
细胞介绍
此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
一、细胞特性
1） 来源：鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞
2） 含量：>1x106 个/mL
3） 形态：不规则圆形，传代时密度要大，易分化
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
二、细胞收到后处理
RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，悬浮细胞需离心处理，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。
三、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；

1. 冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
2. 存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
3. 冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
4. 视具体情况而定。

 ★ 注：如运输过程中导致细胞污染或者死亡，我们将无条件补发 收货后十个工作日内有其他问题提供照片可半价重发。

相关细胞系列表：

Human/人 人皮肤T淋巴细胞瘤细胞；MJ

Human/人 人淋巴细胞瘤细胞；Mino

Human/人 人胰腺导管癌细胞；MIA-PaCa-2

Human/人 低转移人肝癌细胞；MHCC97-L

Human/人 高转移人肝癌细胞；MHCC97-H

Human/人 人胃癌细胞；MGC-803

Human/人 人成骨肉瘤细胞；MG-63

Human/人 子宫内膜癌细胞；MFE-296

Human/人 子宫内膜癌细胞；MFE-280

Human/人 人恶性黑色素瘤细胞；MeWo

Human/人 人膜间皮细胞；MeT-5A