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非冻型细菌RNA保存液

简要描述:

非冻型细菌RNA保存液用传统的RNA提取方法提取到的细菌RNA样品用于细菌基因表达谱研究时,不可避免地会遇到的一个问题,即得到的RNA材料并不能准确反映取样时细菌RNA的真实表达水平,原因之一是细菌RNA的半衰期非常短,一般只有几分钟,哪怕是经过短暂的离心弃培养基处理过程,细菌的RNA水平都会发生明显改变。另一原因是细菌对环境因素的改变非常敏感,温度、密度、离心力等条件的改变都会导致细菌基因表达的

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非冻型细菌RNA保存液

名称

规格

价格

手册

非冻型细菌RNA保存液

100mL

490元

 

用传统的RNA提取方法提取到的细菌RNA样品用于细菌基因表达谱研究时,不可避免地会遇到的一个问题,即得到的RNA材料并不能准确反映取样时细菌RNA的真实表达水平,原因之一是细菌RNA的半衰期非常短,一般只有几分钟,哪怕是经过短暂的离心弃培养基处理过程,细菌的RNA水平都会发生明显改变。另一原因是细菌对环境因素的改变非常敏感,温度、密度、离心力等条件的改变都会导致细菌基因表达的迅速改变。上述两因素的叠加就会使实际得到的RNA表达谱与真实的RNA表达谱之间存在巨大的误差,所以传统的处理方法不适合于细菌RNA表达谱研究。为解决此问题,本公司特推出本产品,它具有下列特点。
1. 能快速渗透到液体培养基中的细菌内,抑制RNA分子的降解或表达谱的改变。
2. 操作简单,直接将本产品和液体样品按比例混合即可。
3. 适用于各种细菌(包括革氏阳性和革氏阴性),也适用于其他微生物样品,如真菌和藻类等。
4. 重复性好,效果跟进口同类产品相当。
5. 处理的样品可直接用于总RNA提取,也可以长期保存。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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