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天净沙细胞蛋白质-RNA双提取试剂盒

简要描述:

天净沙细胞蛋白质-RNA双提取试剂盒本制品是在同一样品中同时高效快速提取Total RNA和Total Protein的试剂盒。本试剂盒的操作过程不用使用苯酚,使用本试剂盒提取的Total RNA和Total Protein可用于siRNA的效果分析、RNA/蛋白质的表达分析等。通常分析经过各种药物处理(或经siRNA Transfection)后的动物培养细胞中的靶mRNA或蛋白质的表达差

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天净沙细胞蛋白质-RNA双提取试剂盒

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天净沙细胞蛋白质-RNA双提取试剂盒

50次

1490元

 

本制品是在同一样品中同时高效快速提取Total RNA和Total Protein的试剂盒。本试剂盒的操作过程不用使用苯酚,使用本试剂盒提取的Total RNA和Total Protein可用于siRNA的效果分析、RNA/蛋白质的表达分析等。通常分析经过各种药物处理(或经siRNA Transfection)后的动物培养细胞中的靶mRNA或蛋白质的表达差异时,需要将培养细胞分成2份,或者进行两次培养,一份用于提取Total RNA,另一份用于提取Total Protein,这样实验操作复杂烦琐,实验数据误差较大。本试剂盒可以从同一样品中同时提取Total RNA和蛋白质,方便了实验操作,提高了实验可信度。本试剂盒使用含非离子性表面活性剂的Cell Lysis Buffer裂解细胞,然后使用盐析法将染色体DNA和细胞残渣除去。实验操作只需15分钟,便可以从1×103~1×107个培养细胞中制备含Total RNA和Total Protein的可溶性溶液,此溶液可直接用于蛋白质电泳和Western Blotting分析等。此溶液经Isopropanol*1沉淀回收Total RNA,再经RNA Preparation Water溶解后的Total RNA溶液*2可用于Real Time RT-PCR法进行mRNA的表达分析等。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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