植物RNAout

植物RNAout

本产品是LMAI Bio自主开发的独特产品，其原理完全不同于异硫氰酸胍/酚/提取方法，克服了后者不能区分RNA（本质上是多糖）和其它植物多糖的缺点，能高效将RNA和其它植物多糖分开，同时还能有效去除多酚和其它植物次级代谢成份。其有效性在近五十多种各类植物（见附录，包括十分棘手的松柏类植物）中得到验证。本产品还可以用于富含粘性糖蛋白的动物组织。
1. 适用于绝大多数植物，从五十多种植物材料中都成功提取到了总RNA，其中包括松针，柏树，香蕉等用胍/酚/方法未能提取到RNA的植物(注：部分植物组织，如果实，含RNase量极高，需要另外加RVC抑制其活性)。
2. 操作简单快速，zui短可以只需要约十五分钟，可以全在室温下进行。
3. 得到的RNA平均 OD260/280在1.9左右，可直接用于RT-PCR等研究。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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