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大提柱式DNA清除剂

简要描述:

大提柱式DNA清除剂本产品是的柱式DNA清除剂(CAT#:90318)的大提升级产品,可用于细胞总RNA样品中基因组DNA污染的去除。目前较常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。本公司开发的大提柱式非酶DNA清除剂不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷,同时还具有下列特点。
1. 处理量大,一次可以处理高

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大提柱式DNA清除剂

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本产品是的柱式DNA清除剂(CAT#:90318)的大提升级产品,可用于细胞总RNA样品中基因组DNA污染的去除。目前zui常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。本公司开发的大提柱式非酶DNA清除剂不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷,同时还具有下列特点。
1. 处理量大,一次可以处理高达400  μg的总RNA。
2. 操作简单快速,全部操作只需要十余分钟。
3. 回收率高达80%以上。
4. 高效,能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平,而RNA分子完整性不受任何影响。
5. 本身不含RNase污染,避免了用DNase处理的zui大问题。
6. 稳定,本产品为非酶产品,可以常温运输和4℃长期保存;而RNase-free DNase的运输和长期保存必须在低温进行。
7. 性价比高,单位成本远低于RNase-free DNase。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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