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菌体内毒素清除剂

简要描述:

菌体内毒素清除剂内毒素(即lipopolysaccharides,LPS)是E.coli细胞壁的主要成分,传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来,然后再用各种方法去除其中的内毒素,操作繁琐,DNA回收率低。本产品可以直接把E.coli表面的内毒素去除,从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取,重组蛋白质提取)的污染。本产品具有下列特点:
1. *在菌体收集阶段去除内毒素的产

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菌体内毒素清除剂

名称

规格

价格

手册

菌体内毒素清除剂

200 mL

390元

 

内毒素(即lipopolysaccharides,LPS)是E.coli细胞壁的主要成分,传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来,然后再用各种方法去除其中的内毒素,操作繁琐,DNA回收率低。本产品可以直接把E.coli表面的内毒素去除,从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取,重组蛋白质提取)的污染。本产品具有下列特点:
1. *在菌体收集阶段去除内毒素的产品,从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触,从根本上防止了可能产生的污染。
2. 操作简单快速,用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素,只需要10分钟左右时间,不需要复杂仪器设备。
3. 高效,能去除99%以上的内毒素。
4. 跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容,DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA丢失率可以高达50%)。
5. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒DNA可用于转染实验。
6. 既可小规模使用(在1.5 mL离心管内),也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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