磁珠动物DNAout

磁珠动物DNAout

本产品是利用磁珠的方法专门用于提取动物组织基因组DNA的试剂盒，所含生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的目的物质。 本试剂盒所含磁珠微粒可以特异地吸附DNA，通过洗涤，去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质，从而达到分离纯化DNA的目的。它具有下列特点：
1.  快速简捷，一般可在36分钟内完成。
2.  所得DNA纯度高， OD260/OD280一般达1.7-1.9。
3.  DNA得率高，使用100 uL磁珠微粒，产率为8-30ug/10mg。
4.  长度可达20kb - 50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
5.  不使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤，而且省去了离心步骤。
6.  性价比高，质量与进口试剂盒相当，但价格更便宜。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。

实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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