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柱式血液DNA-RNAout

简要描述:

柱式血液DNA-RNAout本产品是北京LMAI Bio在柱式血液RNAout(CAT#:71202)基础上开发的升级产品,采用先裂解红细胞后纯化白细胞,再从中分别提取总RNA和DNA的策略。本产品具有下列特点:
1. 本产品可用于血液RNA提取、血液DNA提取以及DNA和RNA双提,充分 利用宝贵的血液样品。

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柱式血液DNA-RNAout

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柱式血液DNA-RNAout

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本产品是北京LMAI Bio在柱式血液RNAout(CAT#:71202)基础上开发的升级产品,采用先裂解红细胞后纯化白细胞,再从中分别提取总RNA和DNA的策略。本产品具有下列特点:
1.   本产品可用于血液RNA提取、血液DNA提取以及DNA和RNA双提,充分      利用宝贵的血液样品。
2.   无需使用有毒的酚和氯,绿色环保。
3.   采取先裂解红细胞的两步法,避免了血红素等对RNA和DNA的污染。
3.   RNA直接从白细胞胞浆中提取,彻底避免了细胞核基因组DNA的污染。
4.   纯度高,RNA的OD260/280均在2.0左右,DNA的OD260/280均在     1.8-1.9左右。
5.   产率高,新鲜血液样品RNA产率一般为5-50 ug/mL,DNA的产率一般在      5-8 ug/mL。对冻存血,RNA和DNA产率跟冻存时间密切相关,波动极大。
6.   与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容。  
7.   得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。所得的DNA      可直接用于PCR、酶切等实验。  
8.  如果需要提取细胞核中的RNA前体,或者提取胞浆中线粒体DNA,则不能     使用本方法。  
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。

实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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