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凋亡DNAout

简要描述:

凋亡DNAout细胞凋亡(Apoptosis)是生命个体中的调控基因为了维持个体生命,调控细胞进行新陈代谢,促使不需要的细胞或者具有危险性的细胞自我凋亡的现象,与细胞的发生、分化、生理现象(特别在免疫方面)有着密切关系。细胞凋亡时,染色体DNA以核小体为单位(185 bp)进行DNA片断化产生DNA Ladder,这些被片断化了的DNA片段,可以使用电泳的方法进行检出。本试剂盒能够从培养细

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细胞凋亡(Apoptosis)是生命个体中的调控基因为了维持个体生命,调控细胞进行新陈代谢,促使不需要的细胞或者具有危险性的细胞自我凋亡的现象,与细胞的发生、分化、生理现象(特别在免疫方面)有着密切关系。细胞凋亡时,染色体DNA以核小体为单位(185 bp)进行DNA片断化产生DNA Ladder,这些被片断化了的DNA片段,可以使用电泳的方法进行检出。本试剂盒能够从培养细胞中选择性地提取片断化DNA,能够最大限度地抑制起妨碍作用的完整的染色体DNA的混入,并可以通过电泳法进行高效检出。具有下列特点:
1. 操作简便:使用Ready-to-Use型试剂。
2. 高灵敏度:能够高灵敏度地检出凋亡细胞的片断化DNA。
3. 高特异性:抑制完整的染色体DNA的混入,选择性地提取断片化DNA。
4. 快速操作:整体操作约需2.5小时。
5. 定 量 性: 与荧光色素组合可以对片断化DNA进行定量。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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