柱式动物线粒体DNAout

柱式动物线粒体DNAout，测序级

线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传
研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和进化研究都需要纯化线粒体DNA。本产品
就是基于先纯化动物细胞线粒体、再从中柱式法纯化其DNA的两步法试剂盒。它具有
下列特点：
1. 即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2. 两步法，先纯化线粒体，再柱式法纯化其中的DNA，有粗提（mtDNA纯化前不用DNase处理线粒体）和精提（mtDNA纯化前用DNase处理线粒体）两套操作方案，适合于各种要求不同的后续实验。
3. 本产品一，测序级次可以处理约107×108个培养细胞，10 mg培养细胞（相当于5瓶150 mm培养细胞）可以纯化到到0.2-0.5 mg线粒体。
4. 本产品适用于各种悬浮培养和贴壁培养动物细胞，不建议用于动物实体组织。
5. 提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，，测序级离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
，测序级相关产品列表：
Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (reducing,6X)  
Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (non reducing,4X)  
Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (reducing,4X)  
LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) 
LDS-Sample Buffer (reducing,4X) 
Leucine Solution（亮氨酸溶液）,0.3%