柱式BAC DNAout

柱式BAC DNAout 

一般而言，使用硅胶柱纯化质粒时，只能纯化小于30 Kb以下的质粒载体，大于30 Kb质粒因牢牢结合在硅胶基质中，会导致质粒产量大大降低。本产品对本公司的柱式质粒提取试剂盒进行优化而得，它采用了改良的细菌裂解和质粒DNA上柱条件，确保大型的质粒（大至100 Kb的质粒）能有效地结合到硅胶柱中，并可高效地洗脱出来。1. 适用于不超过100 Kb的大型质粒DNA，包括BAC、PAC、P1和Cosmid 等。如果超过100 Kb，建议使用沉淀法或离子交换法。
2. 可从1.5-5.0 mL 细菌培养液中纯化1 μg左右大型质粒DNA。
3. 安全，无酚氯等危险的有机物抽提。
4. 柱式操作，比经典的沉淀法操作简单，重复性好，每次都能获得理想效果。
5. 得到的DNA更纯净，可以直接用于PCR、酶切和测序，不需要再纯化。
6. 超值，性价比高。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相， 离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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