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中提柱式BAC DNAout

简要描述:

中提柱式BAC DNAout本产品是柱式BAC DNAOUT的中提升级产品,跟柱式BAC DNAOUT一样,它采用了改良的细菌裂解和质粒DNA上柱条件,确保大型的质粒(大至100 Kb的质粒)能有效地结合到硅胶柱中,并可高效地洗脱出来。其主要区别是一次的处理量增加了5-10倍。
1. 适用于不超过100 Kb的大型质粒DNA,包括BAC、PAC、P1和Cosmid 等。如果超过100 Kb,建议使

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中提柱式BAC DNAout

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本产品是柱式BAC DNAOUT的中提升级产品,跟柱式BAC DNAOUT一样,它采用了改良的细菌裂解和质粒DNA上柱条件,确保大型的质粒(大至100 Kb的质粒)能有效地结合到硅胶柱中,并可高效地洗脱出来。其主要区别是一次的处理量增加了5-10倍。
1. 适用于不超过100 Kb的大型质粒DNA,包括BAC、PAC、P1和Cosmid 等。如果超过100 Kb,建议使用沉淀法或离子交换法。
2. 可从25 ml 细菌培养液中纯化大型质粒DNA。
3. 安全,无酚等危险的有机物抽提。
4. 柱式操作,比经典的沉淀法操作简单,重复性好,每次都能获得理想效果。
5. 得到的DNA更纯净,可以直接用于酶切、PCR和DNA测序,不需要再纯化。
6. 超值,性价比高。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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