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海量PCR片段纯化试剂盒

简要描述:

海量PCR片段纯化试剂盒本试剂盒可用于海量PCR产物回收。在大规模制备PCR产物时(如DNA Marker的制备),往往需要回收毫克级的PCR片段,如果使用传统的大提柱式法,由于需要加3倍体积的上柱液,一次纯化实际处理量只有5-6 mL PCR反应液。此外,由于需要多次(一般需要4-6次)洗脱才能将PCR片段全部从离心吸附柱上回收,得到的PCR片段浓度很难控制(一般都较稀)。为解决上述问题,本公司

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海量PCR片段纯化试剂盒

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海量PCR片段纯化试剂盒

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本试剂盒可用于海量PCR产物回收。在大规模制备PCR产物时(如DNA Marker的制备),往往需要回收毫克级的PCR片段,如果使用传统的大提柱式法,由于需要加3倍体积的上柱液,一次纯化实际处理量只有5-6 mL PCR反应液。此外,由于需要多次(一般需要4-6次)洗脱才能将PCR片段全部从离心吸附柱上回收,得到的PCR片段浓度很难控制(一般都较稀)。为解决上述问题,本公司特开发出本产品,它具有下列提点:
1. 海量处理。本试剂盒一次可以从40mL的PCR反应液中纯化到毫克级的PCR片段,是一般大提离心吸附柱的7-8倍(一次只能纯化6 mL)。
2. 快速。一次操作只需十分钟左右,时间是大提柱式法的1/3左右。
3. 回收的DNA高度浓缩,方便后续使用。由于得到的是DNA沉淀,可以溶解在任何体积的溶液中,而柱式法需要反复洗脱才能得到全部DNA,很难控制最后DNA的终浓度。
4. 回收效率高达90%,但片段长度不能低于100bp。
5. 纯度高。回收的DNA可直接用于电泳、酶切、连接等多种分子生物学实验。
6. 非常容易放量或减量操作。因为是沉淀法,最大处理量由离心管的大小决定,比使用离心吸附柱(最大处理量固定)更加方便。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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