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超级杂交液A(不含甲酰胺)

简要描述:

超级杂交液A(本系列产品是即用型核酸杂交液,可以用于各种条件下的合适、基于膜的杂交(包括Southern Blot和Northern Blot)。其特点是:核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交,由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一,应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度不含甲酰胺)

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超级杂交液A(不含甲酰胺)

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超级杂交液A(不含甲酰胺)

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本系列产品是即用型核酸杂交液,可以用于各种条件下的合适、基于膜的杂交(包括Southern Blot和Northern Blot)。其特点是:核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交,由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一,应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度、杂交液pH及杂交液粘度等因素影响,用户自己摸索和优化相关条件非常繁琐,因此本公司开发了本产品,它具有下列特点:

1. 既可用于Southern杂交(靶分子为DNA),也可用于和Northern杂交(靶分子为RNA),还可以用于菌落杂交,基因芯片等杂交。

2. 既可以用于同位素探针的杂交,也可以用于非同位素探针的杂交。

3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探针,也可以使用RNA探针(包括RNA Oligo)

4. 含多种能够促进杂交的聚合物,使杂交反应能在6~12小时完成,而常规杂交反应一般需要12~24 小时。

5. 含多种封堵剂,能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附,能有效降低背景信号,延长曝光时间以便检测到低拷贝的RNA(Northern)和单拷贝的基因(Southern)。

6. A型不含甲酰胺,B型含50%的甲酰胺。后者使杂交在较低温度就可以完成,适合Tm较高的分子杂交(如RNA-RNA和RNA-DNA杂交)。

7. 跟各种常用的印迹膜兼容,包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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