绿如蓝染料，PCR级

绿如蓝染料，PCR级

第二代的非饱和型荧光染料（如SYBR Green I）在高浓度下会抑制荧光PCR，所以反应重复性很不稳定，并且不能用于要求严格的Tm分析。本产品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一样，是第三代饱和型荧光染料，具有下列特点：

1. 饱和浓度不抑制PCR反应，因此得到的荧光信号更强。

2. 抗水解、抗热解和抗光解的能力强于目前常用的SYBR Green I。

3. 饱和浓度下染料分子没有机会发生移位，荧光强度跟DNA变性程度呈线性关系，可以用于精细的Tm测定实验（如High-resolution melting curve analysis）。

4. 跟目前常用的PCR仪器兼容（包括iCycler、LightCycler、ABI 测序仪）。激发和发射光谱跟FAM和SYBR Green I接近，可以使用SYBR Green I的光学设置参数。

5. 不能渗透进入细胞内，毒性和致突变性远低于SYBR Green I。

6. 使用简单，加入到PCR溶液中即可。

RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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