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即用型长片段PCR试剂盒

简要描述:

即用型长片段PCR试剂盒一般PCR法具有一定的局限性,特别是难以扩增5 Kb以上的长链DNA,这严重限制了PCR法的推广和应用。本产品通过改变PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR扩增条件等,使长链DNA的扩增成为可能。本产品可以很稳定的扩增出终长度小于15 Kb的片段。
1. 方便,试剂盒内含有Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强

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即用型长片段PCR试剂盒

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即用型长片段PCR试剂盒

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一般PCR法具有一定的局限性,特别是难以扩增5 Kb以上的长链DNA,这严重限制了PCR法的推广和应用。本产品通过改变PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR扩增条件等,使长链DNA的扩增成为可能。本产品可以很稳定的扩增出终长度小于15 Kb的片段。

1. 方便,试剂盒内含有Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分,用户只需准备模板和引物既可以进行长片段PCR实验。

2. 快捷,操作步骤已经最大限度地简化,能减少污染,降低实验误差。

3. 各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。

4. 本产品A型含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。

5. 本制品中还配备了LA PCR 增效剂供用户选择使用,可以对扩增GC rich的DNA片段、DNA重复序列、具有复杂立体结构的DNA片段等发挥强大威力。

6. 成分中的稳定剂也使试剂更稳定。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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