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两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)

简要描述:

两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)本试剂盒是整合cDNA*链合成试剂和即用型PCR试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNA*链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。本试剂盒具有下列特点:
1. cDNA*链合成试剂盒具有灵敏度高、使用范围广、使用Random Primer、Oligo dT Primer和基因专一引物等优点。

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两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)

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本试剂盒是整合cDNA*链合成试剂和即用型PCR试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNA*链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。本试剂盒具有下列特点:

1. cDNA*链合成试剂盒具有灵两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)敏度高、使用范围广、使用Random Primer、Oligo dT Primer和基因专一引物等优点。

2. PCR试剂盒具有即用、简单等优点,PCR产物可以直接上样电泳。

3. 两管式操作,RT和PCR在不同试管中进行,本试剂盒可以进行10次逆转录反应,100次PCR反应,便于单独优化反应条件。

4. 收率高,最长可扩增5 Kbp以上的RNA。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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