双酶一管式RT-PCR试剂盒（MMLV-Taq）

双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)

本产品是经过精心优化的、基于MMLV逆转录酶和Taq DNA聚合酶的双酶一管式RT-PCR试剂盒，它含有除模板RNA和其专一性引物以外的所有RT-PCR试剂，包括MMLV逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR缓冲液等，可以在同一反应管内完成RNA→cDNA→PCR反应（RT-PCR反应），本产品特点如下：

1. 一管式完成RT-PCR反应，避双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)免样品交叉污染，尤其适合临床应用。

2. 即开即用，用户不需要单独准备RT-PCR所需的各种试剂。

3. 主要成分只有两个，即RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，将加样步骤减少到了低，极大降低了加样误差，增加了实验的可重复性。

4. 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA 模板。

5. 高灵敏度，每个RT-PCR体系低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模板RNA的长达2000 nt。

6. 所得RT-PCR产物可以直接用于AT克隆。

7. 附赠10次阳性对照（模板及引物），实验失败时便于分析原因。

RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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