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免RNA提取RT-PCR试剂盒

简要描述:

免RNA提取RT-PCR试剂盒本产品是一种免RNA提取的RT-PCR的试剂盒,它使用精心优化的细胞裂解液直接裂解培养细胞和痕量组织块,然后直接在细胞裂解液中进行RT,再用cDNA进行PCR或荧光定量PCR。本产品特点如下:
1. 免RNA提取,从细胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR结果只需3个步骤 约3小时,省略了整个RNA提取过程。

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免RNA提取RT-PCR试剂盒

名称

规格

价格

手册

免RNA提取RT-PCR试剂盒

100次

2900元

 

本产品是一种免RNA提取的RT-PCR的试剂盒,它使用精心优化的细胞裂解液直接裂解培养细胞和痕量组织块,然后直接在细胞裂解液中进行RT,再用cDNA进行PCR或荧光定量PCR。本产品特点如下:

1.  免RNA提取,从细胞裂解到得到RT-PCR或real-time RT-PCR结果只需3个步骤 约3小时,省略了整个RNA提取过程。

2.  灵敏度不低于常规方法(先提总RNA再进行RT-PCR),不但可以检测到低拷贝 的RNA,还可用于检测miRNA。

3.  整合了去除基因组DNA的步骤,只检测RNA,无需担心基因组DNA的污染。

4.  每次只需要10-10000个培养细胞或含相应细胞数的痕量组织(如LCM样品),验证过的细胞包括Hela、CHO、293、COS-7等,但不能用于U937细胞系。

5.  两步法RT-PCR,后续使用灵活。得到的cDNA既可用于普通PCR,也可用于基 于SYBR的荧光定量PCR,也可用于其他定量PCR(如TaqMan),非常灵活。

6.  有单管操作和多孔板操作两种模式,前者适用于少量样品,后者适用于平行处理大量样品,适用于高通量筛查。

7.  本产品足够100次50uL体系的RT反应和600次30uL体系的PCR反应。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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