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天净沙Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒

简要描述:

天净沙Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料,但这些样品通常数量有限,质量不高,并且还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题,本公司根据Ribo-SPIA技术,开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物进行逆转录并得到双链cD

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天净沙Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒

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天净沙Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒

20次

4900元

 

血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料,但这些样品通常数量有限,质量不高,并且还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题,本公司根据Ribo-SPIA技术,开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口,DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应,产生cDNA单链。本产品具有下列特点:

1. 高效,能线性扩增1500-2000倍,能用5-50 ng总RNA模板扩增得到mg级的高纯度cDNA。

2. 步骤简单方便,扩增在恒温进行,只需要4个小时,不需要特殊仪器设备。

3. 保真性好,保持RNA样品中各分子的相对丰度。

4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。

5. 扩增得到的cDNA能直接用于各种后续试验,包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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