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T3体外转录试剂盒

简要描述:

T3体外转录试剂盒本试剂盒是基于沙门氏菌噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有T3启动子的模版DNA,以NTP为底物,从T3启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。本产品具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需要单独准备每一个成份。

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T3体外转录试剂盒

名称

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T3体外转录试剂盒

50次

1490元

 

本试剂盒是基于沙门氏菌噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有T3启动子的模版DNA,以NTP为底物,从T3启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。本产品具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。

3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。

4. 可以合成的RNA的最长度在20 nt到5000 nt之间。

5. 产品配方经过精心优化,每  μg DNA模版可以合成2-6 μg RNA。

6. 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰(RNAi)等实验。

7. 提供A和B两种包装,A型只有转录试剂,B型还有去除模版残留RNase的蛋白酶K溶液、反应结束后去除DNA模版的RNase-free DNase溶液、最后沉淀回收RNA的微量核酸沉淀剂。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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