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天净沙通用型MLPA试剂盒

简要描述:

天净沙通用型MLPA试剂盒多重连接依赖探针扩增(Multiplex ligation dependent probe amplication,MLPA),是一种高通量基因检测技术,它能够于单一反应管內同时检测40多个不同的核苷酸序列的拷贝数变化。该技术已广泛应用于染色体异常、基因点突变、基因缺失、基因甲基化、癌症及mRNA表达研究等医学基因检查领域。本公司MLPA试剂盒克服传统长探针制备复杂、繁琐

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天净沙通用型MLPA试剂盒

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多重连接依赖探针扩增(Multiplex ligation dependent probe amplication,MLPA),是一种高通量基因检测技术,它能够于单一反应管內同时检测40多个不同的核苷酸序列的拷贝数变化。该技术已广泛应用于染色体异常、基因点突变、基因缺失、基因甲基化、癌症及mRNA表达研究等医学基因检查领域。本公司MLPA试剂盒克服传统长探针制备复杂、繁琐的缺点,将长探针分为A段、B段两部分,分别制备。长探针B段有引物结合区、长度填充区和PCR引物结合区组成,长探针A段(客户合成)由基因专一区和上游过桥引物识别区组成,客户只需在合成探针时设计一段过桥引物识别区,即可实现快速、高通量基因检测。该试剂盒具有下列特点:

1. 灵敏度高,特异性强,高通量检测。

2.   精准度高,重复性强,操作简便,24小时出结果。

3.   最低可检测ng级DNA或RNA,可适用石蜡包埋和福尔马林处理等样品。

4.   应用领域广,可用于基因组拷贝数、染色体数目异常检测;基因片段缺失与重排分析;肿瘤细胞检测;基因表达检测;DNA 甲基化、SNP分析等。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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