DNA快速连接试剂盒

DNA快速连接试剂盒

DNA连接反应通过T4连接酶催化双链DNA的3'-OH和5'-P形成磷酸二酯键而将DNA共价连接在一起。被连接的DNA末端可以是粘末端（例如限制性切割EcoRI产生的末端），也可以是平末端（限制性切割Sma I产生的末端）。Pheiffer 等人发现PEG可以促进T4 DNA连接酶催化的连接反应[NAR，11，7853-7871，1983]，连接反应只需十分钟即可完成。本产品就是根据这一原理设计，其特点如下：

1. 超快，整个连接反应只需要室温5分钟左右，反应液可以直接用于转化实验。

2. 高效，溶液配方经过优化，每μg插入DNA连接转化得到的重组子可达107左右。

3. 既可用于平末端连接，也可用于粘末端连接，包括PCR产物与T载体的连接。

4. 简单，客户只需要提供载体和插入片段即可。

RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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