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多克隆抗体

简要描述:

多克隆抗体就是利用T载体两个3'端各带有一个T突出,而PCR扩增产物两个3'端各带有一个A突出的特点,在DNA连接酶的作用下,将PCR产物克隆到T载体中的过程,它是克隆PCR扩增产物的主要手段。本产品提供了完成AT克隆的所有成份,具有下列特点: 1. 一站式,用户只需要准备PCR产物即可进行AT克隆。

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多克隆抗体

抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原刺激所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一种抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。

1. 一站式,用户只需要准备PCR产物即可进行AT克隆。AT克隆就是利用T载体两个3'端各带有一个T突出,而PCR扩增产物两个3'端各带有一个A突出的特点,在DNA连接酶的作用下,将PCR产物克隆到T载体中的过程,它是克隆PCR扩增产物的主要手段。本产品提供了完成AT克隆的所有成份,具有下列特点: 

2. T载体由XcmI酶切方一站式TA克隆试剂盒法制备,两个5'端100%含T突出,自连率几乎为零。

3. 克隆效率高,一次AT克隆实验一般能得到上百个重组子。

4. 阳性率高,一般能到90%以上,大大缩短了筛选工作。

5. 提供供两次实验用的对照插入片段,方便分析实验数据。

6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如BstZI、EcoRI、NotI),便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。

7. 克隆位点两侧分别有T7和SP6 RNA聚合酶启动子,便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。

8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。

9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。

10. 含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

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