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克必隆常态转化液

简要描述:

克必隆常态转化液是LMAI Bio最推出的具有自主知识产权的革命性产品,它能使各种常态的E.coli细胞直接用于快速转化实验,使广大用户不再因为简单的转化实验而再为感受态细胞的制备,保存和运输等繁琐的事情而操心,大大地缩短了基因克隆实验的时间,提高使用者的工作效率。
1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十分方便。常态细胞包括新鲜培养的菌液,新

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克必隆常态转化液

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是LMAI Bio新推出的具有自主知识产权的革命性产品,它能使各种常态的E.coli细胞直接用于快速转化实验,使广大用户不再因为简单的转化实验而再为感受态细胞的制备,保存和运输等繁琐的事情而操心,大大地缩短了基因克隆实验的时间,提高使用者的工作效率。

1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十分方便。常态细胞包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4℃放置数月的培养基菌落,甘油菌种保存液等。

2. 适用菌种和质粒广泛,用过的E.coli菌种包括K12系的DH5α和Tg1,B系的BL21(DE3)。用过的质粒有pGEM,pET和克必隆系列等。

3. 转化效率适中,使用10 ng质粒转化一般能得到上万个转化子)效率在105到106 CFU/μg质粒之间),使用3-5 μL连接液转化一般能得几千个转化子,足够筛选重组子使用(但不适合构建文库)。

4. 单管快速操作,整个操作可以在一个1.5 mL塑料离心管中进行,最短可以在三十分钟内完成,不需要过夜细菌培养,热休克处理甚至恒温摇床,极其适用于自动化的大规模克隆筛选工作。

5. 稳定性好,本可以在-20℃条件下长期保存而不用担心转化效率的降低,而感受态细胞在同样条件下会迅速失去活性。


RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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