Rosetta（DE3）plysS大肠杆菌

Rosetta(DE3)plysS大肠杆菌

Rosetta系列菌株来源于BL21系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。

Rosetta(DE3)plysS菌株来源于RRosetta(DE3)plysS大肠杆菌osetta (DE3)，含有pRARE质粒，能够提供稀有密码子的tRNA，该质粒具有氯霉素抗性；菌株含有的DE3是溶源性的 λDE3，带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝；含有的pLSs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin，使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。

RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，Rosetta(DE3)plysS大肠杆菌离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
Rosetta(DE3)plysS大肠杆菌相关产品列表：

PRMI1640培养基（含10%胎牛血清）

成骨细胞生长因子

成纤维细胞生长因子

成纤维细胞生长因子-2

成纤维细胞生长因子-不含动物成分

动物上皮细胞生长因子

肝细胞生长因子

骨骼肌细胞生长因子

黑色素细胞生长因子

黑色素细胞生长因子-不含TPA

滑膜细胞生长因子

间充质干细胞成骨细胞分化生长因子

间充质干细胞软骨细胞分化生长因子