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动植物膜蛋白微量制备试剂盒

简要描述:

动植物膜蛋白微量制备试剂盒细胞膜蛋白质参与了很多重要的细胞活动,根据它们与膜结合的位置一般分为两种,一种是附着在细胞膜上,另一类是嵌入到细胞膜中间。附着型膜蛋白疏水性较弱,比较容易提取和纯化;而嵌入型膜蛋白疏水型很强,所以在水溶液里面很难溶解,非常难以提取和纯化。LMAI Bio基因根据上述特点,经过精心优化的、开发出专门用于分离纯化这两种膜蛋白的两款产品,它们具有下列特点:

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动植物膜蛋白微量制备试剂盒

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动植物膜蛋白微量制备试剂盒

50次

490元

 

细胞膜蛋白质参与了很多重要的细胞活动,根据它们与膜结合的位置一般分为两种,一种是附着在细胞膜上,另一类是嵌入到细胞膜中间。附着型膜蛋白疏水性较弱,比较容易提取和纯化;而嵌入型膜蛋白疏水型很强,所以在水溶液里面很难溶解,非常难以提取和纯化。LMAI Bio基因根据上述特点,经过精心优化的、开发出专门用于分离纯化这两种膜蛋白的两款产品,它们具有下列特点:

1. 两步法提取,即先纯化细胞膜,再纯化膜蛋白,其他成分(核酸和其他蛋白质)污染较少,膜蛋白纯度远高于总蛋白提出(注意:总蛋白提取得到的蛋白质中也有膜蛋白)。

2. A型适用于附着型膜蛋白,B型适合于整合型膜蛋白。

3. 含多种增溶剂,能使各种膜蛋白都能很好地溶解在水溶液中。

4. 既适用于原核细胞,也适用于真核细胞,既适用于培养细胞,也适用于组织细胞。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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