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蛋白折叠试剂盒

简要描述:

蛋白折叠试剂盒本产品提供使用矩阵方法来确定重组蛋白重折叠的缓冲体系,其中,重组蛋白是通过从包涵体中变性、溶解得到的。基础缓冲体系所形成的矩阵中包含了防止蛋白聚集的强和弱的变性条件。并且可以根据重折叠的蛋白类型的不同向其中加入额外的矩阵因子(详情见下表)。可以检测三个浓度水平的缓冲液成分,因此可以在一个实验中测试多种重折叠条件。可调节的设计确保能够筛选出针对目标蛋白的特定重折叠条件,防止浪费样品和进

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蛋白折叠试剂盒

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蛋白折叠试剂盒

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本产品提供使用矩阵方法来确定重组蛋白重折叠的缓冲体系,其中,重组蛋白是通过从包涵体中变性、溶解得到的。基础缓冲体系所形成的矩阵中包含了防止蛋白聚集的强和弱的变性条件。并且可以根据重折叠的蛋白类型的不同向其中加入额外的矩阵因子(详情见下表)。可以检测三个浓度水平的缓冲液成分,因此可以在一个实验中测试多种重折叠条件。可调节的设计确保能够筛选出针对目标蛋白的特定重折叠条件,防止浪费样品和进行不必要的分析,同时可以大化重折叠的产量。蛋白重折叠试剂盒中有一份详尽的重折叠指南,其中包括分离、溶解和纯化包涵体的详细信息;优化重折叠条件的详细信息;以及分析重折叠收率的详细信息。每种基础重折叠缓冲液均以1.1X储备液的形式提供。每种储备液均含有浓度的变性剂以及55 mM Tris、21 mM NaCl、0.88 mM KCl,pH为 8.2。加入增溶的蛋白样品会额外的引入胍(盐酸胍)。

客户可根据其需要从提供的添加剂中挑选因子3和因子4来制备定制的重折叠条件。表中的数字表明不同添加剂的浓度水平。

产品特点:

1. 可靠,所检测的条件和成分均为重折叠缓冲液中常用、重要的。

2. 方便 , 三个水平的矩阵设计明显地降低第二次优化和数据分析的难度。

3. 可调节,可以按照不同的目标蛋白定制不同的重折叠实验;详细说明了缓冲液成分之间的正向和反向的相互作用,避免了不必要的分析。

4.    高纯试剂,按照极其严格的标准配制试剂,因此可以获得稳定的结果。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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