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包涵体蛋白溶解及复性套装

简要描述:

包涵体蛋白溶解及复性套装用E.coli作为宿主表达得到的重组蛋白往往会形成包涵体,其中的重组蛋白质只完成部分折叠,还没形成最后的正确空间结构,所以没有生物活性,要得到有活性的重组蛋白,还需要后续的溶解和复性(重折叠)处理。目前较常用的溶解包涵体的方法是用尿素,Sarkosyl,盐酸胍等强变性剂,其缺点是包涵体中的重组蛋白质被彻底变性,使后续的蛋白质复性处理效率降低。本产品根据包涵体中的重组蛋白质已

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包涵体蛋白溶解及复性套装

名称

规格

价格

手册

包涵体蛋白溶解及复性套装

100次

1490元

 

用E.coli作为宿主表达得到的重组蛋白往往会形成包涵体,其中的重组蛋白质只完成部分折叠,还没形成最后的正确空间结构,所以没有生物活性,要得到有活性的重组蛋白,还需要后续的溶解和复性(重折叠)处理。目前最常用的溶解包涵体的方法是用尿素,Sarkosyl,盐酸胍等强变性剂,其缺点是包涵体中的重组蛋白质被彻底变性,使后续的蛋白质复性处理效率降低。本产品根据包涵体中的重组蛋白质已经完成了部分折叠这一实事设计,具有下列特点:

1. 一站式,提供包涵体洗涤、溶解和蛋白质复性的所有试剂。

2. 采用温和法溶解包涵体,释放的包涵体蛋白质不彻底变性,还能保持其部分折叠的结构,使后续的复性处理效率提高。

3. 所用复性液基于稀释复性,经过精心优化,有利于大部分蛋白的复性。

4. 还提供五种不同的添加剂,它们可以单独加入复性液,也可以按一定比例进行自由组合,以适应不同的蛋白质折叠需求。 

5. 本试剂盒提供实惠的小规格,用于做预实验用,用户如果选择到合适的溶液组合后,可以单独购买其中的溶液以用于大量制备。

6. 本试剂盒足够100次小规模(1 mL规模)的蛋白质复性实验。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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