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镍柱介质

简要描述:

镍柱介质基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法,其原理是用基因重组的方法使待纯化蛋白的N端或C端携带一段His序列(一般是6个His),然后利用偶联了Ni离子的琼脂糖与His的亲和作用而将His-标记蛋白与其他蛋白质分开,与Ni-琼脂糖结合的蛋白最后用咪唑溶液洗脱即可。本产品就是专门用于纯化带有His标记的蛋白质实验,它具有下列特点:

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镍柱介质

名称

规格

价格

手册

镍柱介质

2mL

150元

 

基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法,其原理是用基因重组的方法使待纯化蛋白的N端或C端携带一段His序列(一般是6个His),然后利用偶联了Ni离子的琼脂糖与His的亲和作用而将His-标记蛋白与其他蛋白质分开,与Ni-琼脂糖结合的蛋白最后用咪唑溶液洗脱即可。本产品就是专门用于纯化带有His标记的蛋白质实验,它具有下列特点:

1. 即开即用,非常方便。

2. 介质为交联的琼脂糖,可以反复使用。

3. Ni偶联牢固,含有5个Ni螯合位点,Ni密度达到20-40 μmol/mL。

4. 结合量大,每mL介质可以结合20-30 mg的蛋白质。

5. 专一性强,一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。

6. 有效pH范围广,在pH3-11之间均可使用。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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