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BCA法蛋白定量试剂盒

简要描述:

BCA法蛋白定量试剂盒本产品是基于BCA法(bicinchoninic acid,二奎啉甲酸法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品,BCA法跟Lowry法的*步完全相同,就是在碱性条件下,蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2,双缩脲)发生的反应,故又叫Biuret反应(Biuret反应本身就可以测定蛋白质浓度,目前仍然是医

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BCA法蛋白定量试剂盒

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BCA法蛋白定量试剂盒

500次

390元

 

本产品是基于BCA法(bicinchoninic acid,二奎啉甲酸法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品,BCA法跟Lowry法的*步完全相同,就是在碱性条件下,蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2,双缩脲)发生的反应,故又叫Biuret反应(Biuret反应本身就可以测定蛋白质浓度,目前仍然是医院血液蛋白定量的方法)。第二步,Cu+与BCA发生反应形成水溶性的紫色化合物,通过分光在562 nm处测定紫色化合物的量就可以精确定量蛋白质浓度,增加BCA反应这一步的原因是BCA检测灵敏度比Biuret反应高100倍左右。

1. 对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对Cu的还原剂和螯合剂敏感。

2. 比Lowry法更加简单快捷,45分钟内完成测定。

3. 试剂稳定,室温可以放置两年,工作液1天内有效。

4. 线性范围在 20-2000  μg/mL(对BSA)。

5. 最小测量体积为1-20 μL。最低测量蛋白量为5  μg/mL。

6. 终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

7. 最短可以检测双肽,所以适合于分子量较小的蛋白质,而Bradford法需要一定大小的蛋白质。

8. 有常规(普通试管)和微量(96孔板)两种检测模式。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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