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非变性法蛋白沉淀试剂盒

简要描述:

非变性法蛋白沉淀本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫酸铵加到蛋白质溶液中,夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层),使之“失水",于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合,使蛋白质形成沉淀,离心分离沉淀后,再用透析方法将蛋白质中的盐除去,即得浓缩的蛋白质。

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非变性法蛋白沉淀

名称

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价格

手册

非变性法蛋白沉淀

10次

1990元

 

本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫酸铵加到蛋白质溶液中,夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层),使之“失水”,于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合,使蛋白质形成沉淀,离心分离沉淀后,再用透析方法将蛋白质中的盐除去非变性法蛋白沉淀,即得浓缩的蛋白质。

本产品以盐析能力最强的硫酸铵作为蛋白质的沉淀剂,其特点是:

1. 适合于浓缩各种蛋白质粗提液。

2. 非变性法,不会破坏蛋白质的天然结构和活性,尤其是适用于对变性敏感的酶溶液。

3. 得到的蛋白质结构稳定,适合于长期保存。

4. 可以在透析是进行缓冲液的调换。

5. 一站式,带有盐析和透析所需的物品。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,非变性法蛋白沉淀离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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