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质谱兼容型蛋白银染试剂盒

简要描述:

质谱兼容型蛋白银染试剂盒银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的较灵敏的方法,MS(质谱)是确定未知蛋白较常用和较快捷的方法,但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题,其中最主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰,这样MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白质实际的氨基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析,为此本公司开发MS兼容型银染试剂盒,其特

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质谱兼容型蛋白银染试剂盒

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质谱兼容型蛋白银染试剂盒

10次

1390元

 

银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的最灵敏的方法,MS(质谱)是确定未知蛋白最常用和最快捷的方法,但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题,其中最主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰,这样MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白质实际的氨基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析,为此本公司开发MS兼容型银染试剂盒,其特点如下:
1. 跟MS兼容,原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂,所得蛋白质没有发生化学修饰,故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。
2. 银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右,可达0.2-0.6 ng蛋白质/条带。
3. 可用于各种PAGE胶,包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE,尿素-PAGE),非变性PAGE胶,IEF胶(等电电泳胶),2D胶等。
4. 四种溶液都是现用现配,实验结果的可重复性好。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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