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银染清除剂

简要描述:

银染清除剂银染是目前较灵敏的非同位素PAGE胶蛋白质染色技术,对银染后的条带进行原位酶切(in-gel digestion)和后续MS分析是蛋白组学研究的重要手段。大量研究表明如果预先对银染条带进行去除银粒子的处理,则原位酶切更加有效,MS灵敏度更高。目前较常用的脱银粒子清除方法(如铁氰酸钾/硫代硫酸钠法、硫酸铜/硫代硫酸钠法)的主要缺点是引入的金属离子会影响后续反应、有的成分还有毒性(如铁氰酸钾

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银染清除剂

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银染清除剂

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1490元

 

银染是目前灵敏的非同位素PAGE胶蛋白质染色技术,对银染后的条带进行原位酶切(in-gel digestion)和后续MS分析是蛋白组学研究的重要手段。大量研究表明如果预先对银染条带进行去除银粒子的处理,则原位酶切更加有效,MS灵敏度更高。目前常用的脱银粒子清除方法(如铁氰酸钾/硫代硫酸钠法、硫酸铜/硫代硫酸钠法)的主要缺点是引入的金属离子会影响后续反应、有的成分还有毒性(如铁氰酸钾)、工作液极不稳定。为克服这些缺点,本公司开发了无毒环保的新型银粒子清除剂,它具有下列特点:
1. 高效,5-10分钟处理即可清除PAGE胶中银染留下的银粒子。
2. 成分不含金属离子,跟原位酶切和质谱分析(包括MALDI-TOF-MS)等后续反应高度兼容。
3. 成分无毒环保,保障研究人员和环境的安全。
4. 既可用于蛋白质银染后的脱银,也可用于核酸银染后的脱银。
5. 即开即用,使用非常方便,不需要配制各种溶液。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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