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一管式TMB显色液A (可溶型)

简要描述:

一管式TMB显色液A (可溶型) 四甲基联苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的显色底物,在辣根过氧化物酶和H2O2存在时,TMB会产生可溶性蓝色产物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450 nm测定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟

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一管式TMB显色液A (可溶型) 

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一管式TMB显色液A (可溶型) 

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四甲基联苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的显色底物,在辣根过氧化物酶和H2O2存在时,TMB会产生可溶性蓝色产物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450 nm测定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟HRP的其他底物(如ABTS和OPD)相比,TMB不但灵敏,而且无毒,所以在ELISA中的应用日趋广泛。一管式TMB显色液A (可溶型) 传统的TMB显色试剂一般由两组份组成(另一个是H2O2),必须在使用前新鲜配制,并且容易产生沉淀,使用相对不太方便,并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点,本公司开发了只有一个溶液的TMB显色液,它具有下列特点:
1. 即开即用,操作简单,用户不需要配制任何溶液。
2. 显色液只是单一溶液,简化了操作步骤,降低了操作误差,结果更加稳定。
3. 既可用于ELISA等的显色液,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
4. 该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂,可以在4℃长期放置。
5. 分沉淀可溶型(A型,适用于ELISA)和沉淀不可溶型(B型,适用于Western免疫检测)两种。
RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,一管式TMB显色液A (可溶型) 离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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